Indietro

ⓘ Nick translation




Nick translation
                                     

ⓘ Nick translation

Il metodo della Nick translation è una tecnica di laboratorio di biologia molecolare che serve per operare la marcatura del DNA ovvero a creare sonde radioattive che potranno servire in seguito per esperimenti quali ad esempio il sequenziamento di un tratto di acido nucleico. La caratteristica che lo contraddistingue è quella di essere una tecnica capace di marcare fino alla totalità del filamento interessato, a differenza di altre tecniche di marcatura che interessano in primis le estremità 5 P o 3 OH del filamento. Vengono scelti per la marcatura degli isotopi radioattivi del fosforo, 32 P marcati sul fosfato α del deossiribonucleotide.

Data la radioattività della tecnica, si è preferito utilizzare in sostituzione dei deossiribonucleotidi legati a molecole che agiscono come fluorofori, al posto degli isotopi radioattivi del fosforo, capaci dunque di mostrare fluorescenza se sottoposti ad adeguata illuminazione in analisi.

Il metodo si avvale di una sequenza di DNA doppio filamento, che una volta purificata viene ad essere tagliata con una endonucleasi a-specifica come la DNAsi capace di causare delle rotture a singolo filamento, in gergo chiamate proprio nick, generate dalla rottura dei legami fosfodiesterici. La presenza di un nick è il substrato di reazione per la DNApolI, che partendo dal punto di rottura inizia ad integrare via i dNTP marcati sostituendo i nucleotidi presenti, non marcati: la capacità di rimozione, detta in gergo attività 5-esonucleasica è un caratteristica intrinseca e distintiva di questa DNA polimerasi DNA-dipendente.

La reazione può essere controllata inibendo chimicamente lenzima, attraverso lintroduzione di tris-EDTA in soluzione: questo causa la denaturazione della miscela enzimatica portando al termine della reazione.

                                     
  • The Last Samurai regia di Edward Zwick Lost in Translation - L amore tradotto Lost in Translation regia di Sofia Coppola American Splendor, regia
  • 1764167 Can t Speak French Radio Edit - 3: 19 Je Ne Parle Pas Français translation by Jérôme Attal - 3: 41 Can t Speak French Tony Lamezma s Passions Remix
  • Gangs of New York 2003: Bill Murray - Lost in Translation - L amore tradotto Lost in Translation 2004: Paul Giamatti - Sideways - In viaggio con
  • a New York Tadpole 2004 Bill Murray - Lost in Translation - L amore tradotto Lost in Translation Jack Black - School of Rock Johnny Depp - La maledizione
  • Ubriaco d amore Punch Drunk Love 2004 Lost in Translation - L amore tradotto Lost in Translation American Splendor Sognando Beckham Bend It Like
  • Curse of the Black Pearl Bill Murray - Lost in Translation - L amore tradotto Lost in Translation Sean Penn - Mystic River Mystic River Ben Kingsley
  • Argentine conscripts own moving accounts of their Falklands War English translation New English Library 1983. ISBN 0 - 450 - 05611 - 2 Kon, Daniel. Los Chicos
  • vittoria ai Golden Globe e ai BAFTA quello del protagonista di Lost in Translation - L amore tradotto 2003 Seguiranno anche Il treno per il Darjeeling
  • Lovely Amazing - Nicole Holofcener 2004 Lost in Translation - L amore tradotto Lost in Translation - Sofia Coppola 21 grammi 21 Grams - Guillermo

Anche gli utenti hanno cercato:

nick translation e random priming, nick translation spiegazione,

...
...
...