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ⓘ Saggio GUS




Saggio GUS
                                     

ⓘ Saggio GUS

Il saggio GUS è una tecnica di biologia molecolare utile per lanalisi dellattività di un promotore. È particolarmente utile e diffusa in biologia molecolare vegetale.

                                     

1. Scopo

Lo scopo di questa tecnica è lanalisi dellattività di un promotore in termini di espressione di un gene sottoposto al promotore in analisi. Lanalisi può essere di tipo quantitativo saggi spettrofotometrici o fluorimetrici o prevedere la localizzazione dellattività tramite colorazione differenziale in differenti tessuti.

La tecnica è basata sullenzima di Escherichia coli beta-glucuronidasi; questo enzima, fornito di specifici substrati incolori e non fluorescenti non endogeni, è in grado di renderli colorati o fluorescenti, dunque visibili alloperatore.

                                     

2. Substrati

Esistono diversi glucuronidi che possono essere usati come substrato della reazione enzimatica. Per la colorazione istochimica viene utilizzato prevalentemente il 5-bromo-4-cloro-3-indolil glucuronide X-Gluc, per i saggi quantitativi il p-nitrofenil β-D-glucuronide saggi spettrofotometrici e il 4-metilumbelliferil-beta-D-glucuronide saggi fluorimetrici.

                                     

3. Storia

Il saggio GUS è stato ideato e sviluppato da Richard Anthony Jefferson nella sua tesi di dottorato allUniversità del Colorado. In seguito Jefferson, al Plant Breeding Institute di Cambridge adattò la tecnica per lapplicazione con materiale vegetale. Da allora migliaia di laboratori nel mondo hanno applicato il suo sistema, rendendo il saggio GUS la tecnica di biologia molecolare vegetale più diffusa al mondo, con oltre 6000 citazioni nella letteratura scientifica.

                                     

4. Organismi di interesse

Un organismo è adatto per il saggio GUS se non ha una propria attività beta-glucuronidasica o la propria attività risulta talmente bassa da rappresentare un disturbo accettabile. Per questa ragione il saggio non può essere utilizzato in quasi tutti i vertebrati e in molti molluschi. Nelle piante superiori, nei muschi, nelle alghe, nei funghi e in quasi tutti i batteri non cè attività GUS endogena, per cui la tecnica può essere usata proficuamente.

                                     

5. Altri sistemi reporter

Oltre al gene uidA per la beta-glucuronidasi, altri geni sono stati utilizzati come reporter per lanalisi dellattività dei promotori. Altri sistemi in competizione con il GUS sono basati su, per esempio, luciferasi, GFP, beta-galattosidasi, cloramfenicolo acetiltransferasi e fosfatasi alcalina.

                                     

6. Altri usi

Il saggio GUS non si limita allo studio del promotore e altre sue applicazioni sono apparse in seguito nella letteratura scientifica. Saggi GUS sono stati utilizzati per la determinazione dellefficienza di trasformazione, giocando un ruolo essenziale nello sviluppo di piante transgeniche. Altri usi dei sistemi reporter in generale sono stati lidentificazione di trasformanti, la localizzazione intracellulare di un prodotto genico, lanalisi delle interazioni proteina-proteina e proteina-DNA e lefficienza dei segnali di inizio traduzione.

                                     

7. Brevetti

  • EN United States Patent 5.268.463, United States Patent and Trademark Office.
  • EN United States Patent 5.432.081, United States Patent and Trademark Office.
  • EN United States Patent 5.599.670, United States Patent and Trademark Office.
                                     
  • i modellini dei guerrieri stellari di King Dedede nel negozio di Gengu. Gus il macchinista di Zeetown. Nonostante il fatto che in tutta Zeetown solo
  • di Central Park. Appare in alcune puntate. Porta un parrucchino. Gustav Gus Babushka: è l addetto ai lavori dello zoo di Central Park ed è un uomo tutto
  • Champ uscito il 28 aprile 1939 Il cugino di Paperino Donald s Cousin Gus uscito il 19 maggio 1939 Picnic sulla spiaggia Beach Picnic uscito il
  • Charles Forte. Sidgwick Jackson Publisher. London, 1986 Hickey, Des Smith, Gus The Star of Shame Arandora Star Madison Publishing. Dublin, 1980. Rea
  • di Augustus. Gus era un giovane devoto, che serviva la mssa ogni giorno prima di andare a lavorare. A un certo punto, padre McGirr e Gus iniziarono a
  • Kenja no mago 賢者の孫? lett. Il nipote del saggio è una serie di light novel scritta da Tsuyoshi Yoshioka e illustrata da Seiji Kikuchi. Sette volumi
  • scrivere inventa storie di sana pianta e il caporedattore del giornale, Gus intuendo il problema lo tiene d occhio, ma i direttori del giornale, vedendo
  • in questione è proprio il giovane Holden. 2000, in Scoprendo Forrester di Gus Van Sant, il personaggio di William Forrester, interpretato da Sean Connery
  • mesi seguenti. L 8 luglio 2014 il sito The Tracking Board ha rivelato che Gus Van Sant sarebbe subentrato a Black in qualità di regista e che Dan Lin

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